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NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒

NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒

货号：
#1010301
#1010302
NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒 (NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit) 可从多种临床样本中分离纯化高质量病原微生物 RNA & DNA 混合核酸。提取过程安全无毒、操作便捷，无需使用酚、氯仿等有毒有害试剂，在保证病原核酸提取效率的同时，可有效去除蛋白质、无机盐及其他杂质。
纯化获得的核酸可直接用于 PCR、qPCR、RT-PCR、宏基因组测序 (mNGS)、靶向测序 (tNGS) 及转录组测序 (RNA-Seq) 文库制备等多种下游应用。
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产品特色

  • 多类样本，广泛兼容：支持血液、拭子、呼吸道样本、无菌体液、唾液、组织、粪便或微生物培养物等多种临床样本中病原微生物 RNA & DNA 的提取，满足不同来源感染性样本的检测需求。
  • 组合裂解，促进释放：采用机械研磨与化学裂解相结合的方式，协同促进不同结构类型病原体的核酸释放，在提高厚壁病原体裂解效率的同时，兼顾低丰度 RNA 病毒核酸的完整性。
  • 有效去除，高效回收：采用高性能磁珠与专属优化的缓冲液系统，最大限度去除蛋白质、盐等杂质及潜在抑制物，实现 RNA & DNA 的高效回收与纯化。
  • 优质核酸，保障检测：获得足量、高纯度、高完整性的 RNA & DNA 混合核酸，为下游分子检测提供优质模板，助力保障检测结果的准确性与可靠性。
  • 严控背景，降低干扰：通过全流程监控外源背景微生物污染，辅助识别并排除背景污染相关的假阳性病原体信号，降低病原体误判风险，提高检测报告的参考价值。
  • 简便操作，自动适配：基于磁珠分离原理，操作简便、设备依赖性低，可与全自动核酸提取仪无缝衔接，支持超高通量样本并行处理。


    • 提取流程

    Workflow

    产品表现

    广泛适配多来源临床感染性样本

    fig.1

    图 1. NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit 对不同类型临床样本的混合核酸共提取性能。A. RNA & DNA 混合核酸产量；B. 核酸纯度；C. 提取产物琼脂糖凝胶电泳图。
    注：BALF：肺泡灌洗液；M: DNA Marker。


    强效裂解促进难破壁病原核酸充分释放

    fig.2

    图 2. NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit 高效裂解促进低载量条件下难破壁病原核酸释放。A. 金黄色葡萄球菌(S. aureus)；B. 烟曲霉 (A. fumigatus)。分别采用 NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit (NadPure)、Vendor A 和 Vendor B 对经 20 倍、40 倍、80 倍和 160 倍稀释的微生物对照品 (已知活性水平的金黄色葡萄球菌和烟曲霉) 进行 RNA 和 DNA 混合核酸提取，并分别取 2 μL 核酸提取产物进行 qPCR 检测。

    高效高质提取助力多类病原灵敏检出

    fig.3

    图 3. 不同磁珠法共提取试剂盒对临床模拟样本中多种病原体的核酸提取性能比较。A. 血浆；B. 拭子；C. 痰液。利用梯度稀释的微生物对照品 (包括已知活性水平/拷贝数的金黄色葡萄球菌、烟曲霉和甲型流感病毒 H9N2) 构建临床模拟样本：分别取 5 μL 经 10 倍 (High)、40 倍 (Medium) 和 160 倍 (Low) 稀释的微生物对照品，加入血浆、拭子及痰液样本中。随后，分别采用 NadPure、Vendor A 和 Vendor B 提取 RNA 和 DNA 混合核酸，并分别取 2 μL 核酸提取产物进行 qPCR 检测。

    全流程严格监控外源背景微生物污染

    表 1. 基于本地自建背景微生物库评估显示 NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit 中低背景菌残留。

    table.1

    取 10 ng 人类基因组 DNA 标准品 (Promega，G1521)，加入 400 μL Nuclease Free Water 中，配制模拟阴性对照样本。采用 NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit 对 模拟阴性对照样本进行 RNA 和 DNA 混合核酸提取，衔接 NadPrep® EZ RNA & DNA Library Co-Preparation Kit 构建宏基因组测序文库。测序模式为 NovaSeq 6000，PE150， 数据量为 1 Gb。

    从容应对复杂感染样本的检测挑战

    fig.4


    图 4. 不同磁珠法共提取试剂盒对临床模拟复杂样本的 tNGS 检测性能比较。利用梯度稀释的微生物对照品构建模拟临床复杂样本 (包括血浆、拭子和痰液，每组各 3 个独立样本)，分别采用 NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit 和 Vendor A 对模拟复杂样本进行 RNA 和 DNA 混合核酸提取，衔接 NadPrep® EZ RNA & DNA Library Co-Preparation Kit 构建预文库，以 μCaler® HyperMix Hybrid Capture Kit (for Illumina®) 和 μCaler® RIA Panel v1.0 完成杂交捕获。测序模式为 NovaSeq 6000，PE150。
    注：微生物对照品涵盖肠道沙门氏菌 (S. enterica)、流感嗜血杆菌 (H. influenzae)、肺炎克雷伯氏菌 (K. pneumoniae)、铜绿假单胞菌 (P. aeruginosa)、大肠埃希菌 (E. coli) 、肺炎链球菌 (S. pneumoniae)、金黄色葡萄球菌 (S. aureus)、鲍曼不动杆菌 (A. baumannii)、屎肠球菌 (E. faecium)、小肠结肠炎耶尔森氏菌 (Y. enterocolitica)、烟曲霉 (A. fumigatus)、黑曲霉 (A. niger)、白色念珠菌 (C. albicans) 和甲型流感病毒 H9N2。RPM 为每百万映射的 read 数。


    本产品仅限研究使用，不用于临床诊断。

    包装编号  管盖颜色 组分名称  包装体积
    1010301 (24 rxn)     		包装体积
    1010302     (96 rxn)
    Box1

    /

    		Lysis & Grinding Tube 24 unit 96 unit

    /

    		Patho-Lysis Buffer 5 mL 19.5 mL

    /

    		Patho-Binding Buffer 6 mL 24 mL
    Patho-Magnetic Beads 720 μL 2×1440 μL

    /

    		Patho-Wash Buffer 1 25.5 mL 105 mL

    /

    		Patho-Wash Buffer 2 8 mL 32 mL

    /

    		Elution Buffer 2.5 mL 10 mL
    Box2

    or /

    		Proteinase K 960 μL 4 mL


    本产品仅限研究使用，不用于临床诊断。

    NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒能否只提取 RNA 或 DNA？

    本试剂盒专门针对 RNA & DNA 共提取进行了优化，可从同一份样本中同时提取病毒、细菌和真菌等病原微生物的 RNA 和 DNA，所得产物为混合核酸。如下游应用仅需要 RNA 或 DNA，可根据具体实验需求，在提取后增加相应的核酸酶处理步骤。相关处理条件应根据下游应用需求及所使用核酸酶产品的说明书进行设置，并经实验验证。

    使用 NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒提取的核酸产量过低的可能原因有哪些？该如何解决？
    • 样本：样本保存不当、反复冻融或保存时间过长，可能影响核酸稳定性，从而导致核酸提取产量降低。建议按照使本用说明书推荐条件保存和处理样本，尽量避免反复冻融，并优先使用新鲜样本。对于特殊样本，应按照本说明书要求进行预处理。例如，黏稠样本 (如痰液) 应根据样本黏稠程度进行预液化处理；全血样本应按照要求加入等体积的 1X PBS 或无菌生理盐水进行预处理。本使用说明书中未列明的样本类型，可咨询纳昂达技术支持 (support@njnad.com)，或采用经验证的预处理方法进行处理。此外，样本本身病原体载量过低，也可能导致核酸提取产量较低或未检出核酸。对于此类样本，可适当增加提取次数，并采用较小体积进行洗脱，以提高核酸浓度；
    • 试剂：Patho-Lysis Buffer 和 Patho-Binding Buffer 出现沉淀且未完全溶解，可能影响核酸提取效果。使用前应检查上述试剂，如有沉淀，应于 56℃ 水浴/金属浴中加热至沉淀完全融解，充分涡旋振荡混匀并平衡至室温后方可使用；
    • 操作：1) 样本裂解不充分可能导致核酸释放不足。应严格按照本说明书进行裂解操作，确保充分混匀，并满足规定的裂解时间及操作条件。2) 洗涤过程中操作不当可能造成磁珠损失。使用 Patho-Wash Buffer 1 (已加入无水乙醇) 和 Patho-Wash Buffer 2 (已加入无水乙醇) 进行洗涤时，应避免吸取或扰动磁珠。磁珠干燥时间约为 5 min，应避免过度干燥，以免影响后续核酸洗脱效率。
    NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒对于难破壁的真菌或革兰氏阳性细菌的提取效果如何？

    本试剂盒采用机械裂解与化学裂解相结合的方式进行样本裂解，可用于真菌 (如酵母菌、念珠菌) 和革兰氏阳性细菌等细胞壁较厚微生物的核酸提取。对于此类样本，应按照本使用说明书要求进行裂解，以确保核酸充分释放。实际提取效果可能受样本类型、病原体含量及样本处理等因素影响。

    NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒提取的核酸纯度过低的可能原因有哪些？该如何解决？
    • 洗涤液使用不当：Patho-Wash Buffer 1 和 Patho-Wash Buffer 2 首次使用前未按照瓶身标签要求加入无水乙醇，或使用过程中乙醇挥发，可能影响洗涤效果。首次使用前，应按照瓶身标签要求加入无水乙醇并充分混匀；使用过程中应及时盖紧瓶盖，避免乙醇挥发。
    • 洗涤不充分或洗涤液残留：未完成规定的洗涤步骤，或磁分离后残留洗涤液，可能影响核酸纯度及后续实验。应严格按照本使用说明书完成规定的洗涤步骤；洗涤后进行磁珠分离，并尽可能去除残留液体。磁珠干燥约 5 min，待残留液体充分挥发后再进行洗脱，同时避免过度干燥。
    使用 NadPure 病原微生物 RNA & DNA 共提取试剂盒获得的核酸用于下游实验失败的可能原因有哪些？该如何解决？
    • 核酸产量不足：核酸浓度过低可能无法满足下游实验要求。建议检查样本质量、样本预处理、裂解、磁珠结合及洗脱等关键操作步骤，必要时结合内参、阳性对照或阴性对照结果进行判断；
    • 核酸纯度不佳：洗脱产物中残留洗涤液等杂质，可能影响下游实验。应确保洗涤液按照要求配制，严格完成规定的洗涤步骤，并在洗脱前充分去除残留液体；
    • 实验过程存在异常或污染：建议根据具体下游应用设置相应的内参、阳性对照和阴性对照，以辅助判断核酸提取及后续实验过程是否正常，并排查可能存在的污染。
    产品 货号
    NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit, 24 rxn
    		 1010301
    NadPure Microbial Pathogens RNA & DNA Kit, 96 rxn
    		 1010302
    本产品仅限研究使用，不用于临床诊断。

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