这是指读长的结构，其中 M 为分子标签读长；S 为忽略的碱基读长；T 为模板读长；“+”代表剩余碱基均为模板读长。双端应分别设置。对于每条 read 的前 7 个碱基：前三个是 UMI，后 4 个是固定碱基，第 8 个碱基即为插入序列第一个碱基，故 UMI 分析时需提取前 3 个碱基。
不同类型样本文库混合环化后测序数据产出可能存在差异，下图数据仅供参考 。
本试剂盒经优化设计，可兼容 MGI 平台 SI 或 DI 接头类型的文库环化，以及 NadPrep® Universal Stubby Adapter (UDI) 接头类型文库或经过 MGIEasy 通用文库转换试剂盒（App-A）转换文库的环化。推荐针对不同类型的文库单独进行环化。
|
可能原因 |
解决方案 |
|
转化后文库被未转化文库污染 |
使用带滤芯 Tips；转化结束后及时更换新的乳胶手套， 更换新的工作台面以及新的移液器。 |
|
Bisulfite Reagent 容易发生氧化，结晶析出，导致亚硫酸盐溶液浓度降低，影响转化效率 |
在有效期以内使用转化试剂盒；控制 Bisulfite Reagent 暴露在空气中的时间。 |
|
投入量过高 |
使用酶转化方案时，严格控制样本投入量，推荐投入量 在 10-200 ng 之间。 |
|
可能原因 |
解决方案 |
|
原始样本定量存在误差 |
实际起始投入量偏低，建议使用 Qubit 进行精确定量 |
| 磁珠纯化过程中丢弃部分磁珠 | 采用涡旋混匀时，确保管盖紧闭，弃上清过程切勿丢弃磁珠 |
|
低投入量样本使用重亚硫酸盐转化方案时，单链 DNA 回收效率较低。PCR 扩增循环数差3 个左右 |
增加扩增循环数，低投入量样本选择酶转化方案。 |
数据产出低的可能原因是同条 lane 甲基化测序量占比高于 70%，需提高非甲基化文库的占比，推荐每条 lane 中非甲基化文库测序量占比不低于 30%。
热变性程序结束后，PCR 管未迅速降温，最终导致环化效率偏低，在操作过程中需立即将 PCR 管置于冰浴中。
环化效率 = (环化 ssDNA 产物总量×2)/投入 dsDNA 总量。本试剂盒对常规文库的环化效率在 20%-40% 之间。
可以。本试剂盒经优化设计，可兼容 MGI 平台 SI 或 DI 接头类型的文库进行环化。
本试剂盒对不同样本类型、插入片段的文库均有良好的兼容性，可适用于绝大部分类型文库，例如 gDNA、cfDNA、多重
PCR 产物、FFPE DNA、甲基化 DNA、RNA 样本制备的文库。